限制性内切核酸酶 BglⅡ识别的序列为 A GATCT,BamHI 识别的序列为 GGATCC,用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA,不必使酶失活,就可以直接通过黏性末端连接法进行连接。
平末端连接法(blunt end ligation)的连接效率比黏性末端连接的效率低得多,所以通常在连接反应体系中适量添加促进大分子凝聚的凝聚剂,以提高平末端 DNA连接的效率。常用的凝聚剂是()。
如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA 产生 5,突出的黏性末端,则可以用();进行 3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA 产生的是 3’突出的黏性末端,可以用()进行 3’末端标记。
黏性末端连接法,不仅操作方便,而且()
pBR322可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接,无论用哪种方法连接,都可以用同一种酶回收外源片段。
T4DNA连接酶和 E.coli 连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。
黏性末端
鱼蓉面坯不能产生黏性的原因是:()。
1984 年,Hung 和 Wesink 发现如果两个不同的 5’黏性末端通过部分填补得到如下的单链突出末端,即可有效地相互连接: (1)();(2)();(3)()。
用不同的产生黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源 DNA,得到的黏性末端是不亲和的黏性末端。
λ噬菌体的基因组 DNA为()kb,有()多个基因。在体内,它有两种复制方式,扩增时(早期复制)按()复制,成熟包装(晚期复制)则是按()复制。它有一个复制起点,进行()向复制。丸噬菌体的 DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在,并且能够自然成环。其原因主要是在久噬菌体线性 DNA分子的两端各有一个()个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做()位点。
电阻分压器的匹配电阻可以采用首端匹配,末端匹配和两端匹配。()
接地的末端支线不允许()连接。
不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。
馈线的母地线末端不能与走线梯相连接,并必须做好()处理。
电容分压器的匹配电阻只能采用末端匹配的方法。
雷电冲击试验时,电阻分压器的匹配电阻可以为首端匹配,末端匹配和首末端匹配。()
用同一种酶切割载体和外源 DNA得到黏性末端后,为防止它们自身环化,要用 CIP将它们脱磷酸。
凡是带电的裸露可接近的金属部分均必须接地。接地必须可靠,不能因建筑物构筑物的维修而中断,接地的末端支线不允许串联连接。
黏性末端连接法,不仅操作方便,而且
用Klenow酶填补的办法可使5&39;黏性末端转变成平末端。这种方法常使DNA上的某些限制酶的识别位点消失。请问,对于下列限制酶,用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失?BamH Ⅰ(G↓GATCC)、Taq Ⅰ(T↓CGA)、BssH Ⅱ(G↓CGCGC)。
58、接地的末端支线不允许() 连接。
选择在12℃~16℃之间用DNA连接酶进行黏性末端连接反应,是为了达到什么之间的平衡()?
下列关于生物工程相关知识的叙述,正确的是①在基因工程操作中为了获得重组质粒,可以用不同的限制性内切酶切割质粒和目的基因,但露出的黏性末端必须相同②只要B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,就能产生单克隆抗体③蛋白质工程的目标是通过基因重组,合成生物体本来没有的蛋白质④太空育种获得 植株也存在与转基因植物一样的安全性问题⑤生态农业使废物资源化,提高能量的传递效率,减少了环境污染⑥诱导细胞融合之前,需将抗原反复注射给实验小鼠,目的是获得产生单一抗体的浆细胞()